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Tuner 化学感受态细胞
物品单位 价格 品牌
360 Tolo Bio
  • 产地:China
  • 型号:10 ×100ul
  • 货号:CC96141
  • 发布日期: 2022-06-13
  • 更新日期: 2022-06-14
产品详细说明
产地 China
品牌 Tolo Bio
货号 CC96141
用途范围 Research Grade
纯度 %
CAS编号
规格 10 ×100ul
是否进口

产品简介

Tuner 系列菌株是 lacZY 删除的 BL21 突变菌株,其中 lacY 的突变使得 IPTG 能够进入所有细胞的胞 内,从而使得蛋白的诱导水平具有 IPTG 的浓度依赖性。当与 pET 系列载体联合使用时,可使蛋白的 表达量从低表达水平到超高表达水平的范围内进行有效的调节;而在蛋白表达水平低的情况下, 目的蛋白可能会呈现更好的可溶性和活性。因此,Tuner 系列菌株的蛋白表达水平可以通过 IPTG 浓度来进行精确而严谨的调控。此外,Tuner 系列菌株还是 Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷型菌株。由于 该菌株不含有 λDE3 序列,不表达 T7 RNA 聚合酶,因此不能用于 T7 启动子系列质粒的蛋白表达。 经 pUC19 质粒转化检测,Tuner 感受态细胞的转化效率可达 108 cfu/μg DNA。

存储条件

-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

无外源质粒 DNA 残留;

化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC19 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰浴中融化;

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min;

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90s 后,立刻置于冰水浴中静置 2-3 min;

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),后置于 37 ℃摇床复壮 45 min;

5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用;

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;

3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可;

4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。

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