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Rosetta-gami 2 (DE3)pLacl 化学感受态细胞
物品单位 价格 品牌
360 Tolo Bio
  • 产地:China
  • 型号:10 ×100ul
  • 货号:CC96120
  • 发布日期: 2022-06-13
  • 更新日期: 2022-06-15
产品详细说明
产地 China
品牌 Tolo Bio
货号 CC96120
用途范围 Research Grade
纯度 %
CAS编号
规格 10 ×100ul
是否进口

产品简介 

Rosetta-gami 2 系列菌株是集合了 Rosetta 2 系列菌株和 Origami 2 系列菌株的优点;Rosetta-gami 2 (DE3)系列菌株是来源于 Origami 2 系列菌株,在其染色体上带有溶源性的 λDE3,可表达 T7 RNA 聚合酶。由于该菌株不含卡纳抗性,适用于 pET 系列载体及其他 T7 启动子系列载体。该菌株携带 有 trxB 和 gor 基因突变,从而提高了含二硫键正确折叠蛋白的表达效率;同时带有的 pLacIRARE2 质粒(携带氯霉素抗性),除了能够提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有 的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六个稀有密码子的 tRNA 外,还提供了第七个稀有密码子 CGG 的 tRNA,因而能够增强真核细 胞蛋白在大肠杆菌中的表达水平。此外,LacI 蛋白也可以抑制 T7lac 启动子在无诱导剂时 的本底表达。经 pUC19 质粒转化检测,Rosetta-gami 2 (DE3) pLacI 感受态细胞的转化效率可达 107 cfu/μg DNA。

产品组成

基因型:Δ(ara-leu)7697 lacX74 phoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pLacIRARE2 (CamR , StrR , TetR )

存储条件

-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制 

除 pLacIRARE2 外,无外源质粒 DNA 残留; 

化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC19 DNA。 

使用方法 1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化; 

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30min; 

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90s 后,立刻置于冰水浴中静置 2-3 min; 

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),后置于 37 ℃摇床复壮 45 min; 

5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。 

注意事项 

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用; 

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10; 

3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可; 

4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。

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