产地 | China |
品牌 | Tolo Bio |
货号 | CC96112 |
用途范围 | Research Grade |
纯度 | % |
规格 | 10 ×100ul |
是否进口 | 否 |
产品简介
Rosetta 系列菌株来源于 BL21 系列宿主菌,该系列菌株含有原本在大肠杆菌中稀少的真核细胞密码 子,增加了真核细胞的蛋白表达水平。Rosetta(DE3)pLysS 来源于 Rosetta(DE3),菌株能够提供 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 稀有密码子的 tRNA。Rosetta(DE3)pLysS 载体通过提供稀有 密码子,使得该宿主菌相对于其他大肠杆菌,能够提供更加“通用”的蛋白质表达,从而提升目的蛋 白表达水平。DE3 是溶源性的 λDE3, 所以带有 T7 RNA 聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于 pET 系列载 体,及其他 T7 启动子系列载体。含有 pLysSRARE2 质粒,能够产生 T7 溶菌酶,可以有效降低目的基因 的基础表达水平,该质粒具有氯霉素抗性。pLysSRARE2 质粒的起始复制位点是 p15 Origin, 这使得该质粒能够和 pUC- 及 pBR322- 衍生的质粒互相共存。经 pUC19 质粒转化检测, Rosetta(DE3)pLysS 感受态细胞的转化效率可达 107 cfu/μg DNA 以上。
产品组成
基因型:F - ompT hsdSB (rB -mB - ) gal dcm (DE3) pLysSRARE2 (CamR )
存储条件
-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
除 pLysSRARE2 外,无外源质粒 DNA 残留;
化学法转化效率≥107 cfu/μg pUC19 DNA。
使用方法
1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;
2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min;
3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90 s 后,立刻置于冰水浴中静置 2-3 min;
4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min;
5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。
注意事项
1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用;
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;
3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可;
4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。
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