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Rosetta (DE3) 化学感受态细胞
物品单位 价格 品牌
240 Tolo Bio
  • 产地:China
  • 型号:10 ×100ul
  • 货号:CC96109
  • 发布日期: 2022-06-13
  • 更新日期: 2022-06-15
产品详细说明
产地 China
品牌 Tolo Bio
货号 CC96109
用途范围 Research Grade
纯度 %
CAS编号
规格 10 ×100ul
是否进口

产品简介 

Rosetta(DE3)菌株具有氯霉素抗性,补充大肠杆菌缺乏的 6 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)对应的 tRNA,提高外源基因(特别是真核基因)在原核系统中的表达水平。该菌株的 染色体上整合了 λ 噬菌体 DE3 区(DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶),可同时表达 T7 RNA 聚 合酶和大肠杆菌 RNA 聚合酶,因此可用于 pET 系列,pGEX,pMAL 等质粒的蛋白表达。经 pUC19 质粒转化检测,Rosetta(DE3)感受态细胞的转化效率可达 107 cfu/μg DNA。

产品组成

基因型:F - ompT hsdSB (rB -mB - ) gal dcm (DE3) pRARE(argU, argW, ileX, glyT, leuW, proL) (CamR )

存储条件 

-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 

质量控制 

除 pRARE 外,无外源质粒 DNA 残留;

化 学法转化效率≥107 cfu/μg pUC19 DNA。 

使用方法 

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化; 

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min; 

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90 s 后,立刻置于冰浴中静置 2-3 min; 

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min; 

5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。 

注意事项 

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用; 

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10; 

3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可; 

4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。 

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