产地 | China |
品牌 | Tolo Bio |
货号 | CC96190 |
用途范围 | Research Grade |
纯度 | % |
规格 | 10 ×100ul |
是否进口 | 否 |
产品简介
M15(pREP4)蛋白表达菌株含有 pREP4 质粒,该质粒通过 p15A 复制子启动复制,可以与许多原核 表达质粒共存于同一大肠杆菌细胞中;同时该质粒携带 lacI 基因,可高效表达 LacI 抑制蛋白,在 IPTG 诱导前可抑制目标蛋白的本底表达,特别适合毒性基因的表达。M15(pREP4)菌株是 PQE 系 列质粒的配套菌株,特别适合 PQE 系列质粒或由 E. coli T5 启动子驱动蛋白表达的质粒。pREP4 质 粒赋予该菌株卡那霉素抗性。吐露港生产的 M15(pREP4)感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19 质粒 检测转化效率达 108 cfu/μg DNA。
产品组成
基因型:F - φ80 lacZ M15 thi lac- mtlrecA+ KanR
存储条件
-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
无外源质粒 DNA 残留;
化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC19 DNA。
使用方法
1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;
2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min;
3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90s 后,立刻置于冰水浴中静置 2-3 min;
4. 向离心管中加入 900μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min;
5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。
注意事项
1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用;
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;
3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可;
4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。
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