物品单位 | 价格 | 品牌 |
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支 | 360 | Tolo Bio |
产地 | China |
品牌 | Tolo Bio |
货号 | CC96169 |
用途范围 | Research Grade |
纯度 | % |
CAS编号 | |
规格 | 10 ×100ul |
是否进口 | 否 |
产品简介
大肠杆菌 Lemo21(DE3)感受态细胞为 T7 可控表达菌株,专为表达具有挑战性的重组蛋白而设计。 它作为 BL21(DE3)的衍生菌株,不仅继承了其特点,还能够通过改变 T7 溶菌酶(lysY)的水平以 控制表达水平, T7 溶菌酶为 T7 RNA 聚合酶的天然抑制剂。对蛋白表达的精准控制使得 Lemo21(DE3) 成为表达膜蛋白、毒性蛋白、分泌蛋白以及存在可溶性问题蛋白的理想选择。 Lemo21(DE3)感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19 质粒检测转化效率>108 cfu/μg DNA。
产品组成
基因型:fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm] ?hsdS/ pLemo(CamR )DE3 = λ sBamHIo ?EcoRI-B int::(lacI::PlacUV5::T7 gene1) i21 ?nin5 pLemo = pACYC184-PrhaBAD-lysY
产品特性
-BL21(DE3)的增强型菌株; - 精准的表达调控; - 在 T7 菌株中表达范围最宽; - 消除了形成包涵体的潜在可能。
存储条件
-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
无外源质粒 DNA 残留; 化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC19 DNA。
使用方法
1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;
2. 将待转化 DNA 加入到 100μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30min;
3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90s 后,立刻置于冰水浴中静置 2-3 min;
4. 向离心管中加入 900μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min;
5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。
注意事项
1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用;
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;
3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可;
4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。
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