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BL21(DE3)/pLysS 化学感受态细胞
物品单位 价格 品牌
360 Tolo Bio
  • 产地:China
  • 型号:10 ×100ul
  • 货号:CC96164
  • 发布日期: 2022-06-13
  • 更新日期: 2022-06-15
产品详细说明
产地 China
品牌 Tolo Bio
货号 CC96164
用途范围 Research Grade
纯度 %
CAS编号
规格 10 ×100ul
是否进口

产品简介 

BL21(DE3)/pLysS 菌株携带 pLysS 质粒,具有氯霉素抗性。pLysS 含有表达 T7 溶菌酶的基因,T7 溶菌酶 可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰 IPTG 诱导的表达,适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。该菌株染色体整合了 λ(DE3)序列,可表达 T7 RNA 聚合酶,适合于 T7 启动子系列质粒的蛋白表达。该感受态细胞经 pUC19 质粒检测,其转化效率高达 108 cfu/μg DNA。 

产品组成 

基因型:F - ompT hsdS (rB -mB - ) gal dcm (DE3) pLysS CamR

存储条件 

-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

产品特性 

该菌株为 recA+基因型,故不用于质粒的保存;

属于大肠杆菌 B 株系列,可用于以 T7 RNA 聚合酶为表达系统的蛋白表达; 

pLysS 含有表达 T7 溶菌酶的基因,T7 溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,能够 降低目的基因的背景表达水平,但不干扰 IPTG 诱导的表达,适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 

质量控制 

除 pLysS 外,无外源质粒 DNA 残留; 

化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC19 DNA。 

使用方法 

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化; 

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min; 

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90 s 后,立刻置于冰水浴中静置 2-3 min; 

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min; 

5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项 

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用; 

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10; 

3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可; 

4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。 

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