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Stable化学感受态细胞
物品单位 价格 品牌
240 Tolo Bio
  • 产地:China
  • 型号:10 ×100ul
  • 货号:CC96175
  • 发布日期: 2022-06-13
  • 更新日期: 2022-06-15
产品详细说明
产地 China
品牌 Tolo Bio
货号 CC96175
用途范围 Research Grade
纯度 %
CAS编号
规格 10 ×100ul
是否进口

产品简介 

Stable 高转化效率菌株是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株,特别适合于慢病毒或具有末端重 复序列 DNA 片段的克隆。基因组含有 recA1 和 relA1 突变,可有效抑制长片段末端重复区的重组,降 低错误重组的概率;同时含有核酸酶 endA1 突变,避免了提取质粒过程中核酸酶的污染,大 大提高了高纯度病毒质粒的产量和质量。lacZΔM15 的存在使 Stable 可用于蓝、白斑筛选,此菌株 具有四环素和链霉素抗性。利用该菌株克隆含有重复序列的 DNA 时,推荐在 30 ℃进行培养。经 pUC19 质粒转化检测,Stable 感受态细胞的转化效率可达 108 cfu/μg DNA。 

产品组成

基因型:F' proAB lacIq ?(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR ) ?(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ?lacX74 galK16 galE15 e14- φ80 ?lacZ?M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR ) rph spoT1 ?(mrr-hsdRMS -mcrBC)

存储条件 

-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 

质量控制 

无外源质粒 DNA 残留; 化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC19 DNA。 

使用方法 

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰浴中融化; 

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min; 

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90s 后,立刻置于冰浴中静置 2-3 min; 

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基(室温或 30 ℃预热),后置于 30 ℃摇床复壮 60 min; 

5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上:若克隆的质粒中含有重复 序列时,将平板置于于 30 ℃培养箱培养 24 h;否则,则可以将平板置于 37 ℃过夜培养。 

注意事项 

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用; 

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;

 3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可; 

4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。 

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