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GT115化学感受态细胞
物品单位 价格 品牌
500 Tolo Bio
  • 产地:China
  • 型号:10 ×100ul
  • 货号:CC96176
  • 发布日期: 2022-06-13
  • 更新日期: 2022-06-16
产品详细说明
产地 China
品牌 Tolo Bio
货号 CC96176
用途范围 Research Grade
纯度 %
CAS编号
规格 10 ×100ul
是否进口

产品简介 

GT115 菌株,是专门用来克隆含有发夹结构(Hairpin)或重复序列等 DNA 二级结构的基因序列的大肠 杆菌菌株。大肠杆菌中存在一种 SbcCD 蛋白复合体,可以识别 DNA 发夹结构,并将其切除;将 sbcC 和 sbcD 两个基因突变,便增强了发夹结构 DNA 的稳定性。同时在大肠杆菌基因组中引入 uidA(?MluI)::pir-116,使 GT115 可以表达 π 蛋白,从而让含有 R6Kg ori 复制子的质粒(如 pCpG-mcs、 pCpG-LacZ、pCpG-siRNA 等)可以在该菌株中正常复制。该菌株还含有具有核酸酶 (endA)突 变、重组酶 (recA)突变,因此可以增强外源 DNA 的稳定性。经 pUC19 质粒转化检测,GT115 感受 态细胞的转化效率可达 108 cfu/μg DNA。

产品组成

基因型:F - mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZ?M15?lacX74 recA1 rpsL (StrR ) endA1 ?dcm uidA (?MluI)::pir116 ?sbcC-sbcD  

存储条件 

-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 

质量控制 

无外源质粒 DNA 残留; 

化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC19 DNA。 

使用方法 

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰浴中融化; 

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min; 

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90s 后,立刻置于冰浴中静置 2-3 min; 

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),后置于 37 ℃摇床复壮 45 min; 

5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。 

注意事项 

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用; 

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10; 

3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可; 

4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。

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