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EPI400化学感受态细胞
物品单位 价格 品牌
340 Tolo Bio
  • 产地:China
  • 型号:10 ×100ul
  • 货号:CC96177
  • 发布日期: 2022-06-13
  • 更新日期: 2022-06-16
产品详细说明
产地 China
品牌 Tolo Bio
货号 CC96177
用途范围 Research Grade
纯度 %
CAS编号
规格 10 ×100ul
是否进口

产品简介 

EPI400 来源于 EC100 菌株,将 EC100 核基因中控制质粒拷贝数的 pcnB 基因改造成诱导型启动子驱动 后获得了 EPI400 菌株。EPI400 菌株可以显著降低大部分质粒的拷贝数,特别适合于各种含不稳 定 DNA 的质粒或含有毒性基因的克隆;在加入 CopyMore 400 诱导剂后可将质粒的拷贝数提高至正常 状态。mcrA 突变和 mrr-hsdRMS-mcrBC 缺失的基因型使得 EPI400 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲 基腺嘌呤的 DNA 。recA1 和 endA1 突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。 lacZΔM15 标记的存在使 EPI400 可用于蓝白斑筛选,tonA 突变赋予其抗噬菌体 T1 和 T5 的能力, rpsL 突变赋予其链霉素抗性。经 pUC19 质粒转化检测,EPI400 感受态细胞的转化效率可达 107 cfu/μg DNA。

产品组成 

基因型:F - mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 (ara, leu)7697 galU galK λ - rpsL (StrR ) nupG trfA tonA pcnB dhfr

存储条件 

-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 

质量控制 

无外源质粒 DNA 残留 

化学法转化效率≥107 cfu/μg pUC19 DNA 

使用方法 

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰浴中融化; 

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min; 

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90s 后,立刻置于冰浴中静置 2-3 min; 

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),后置于 37 ℃摇床复壮 45 min; 

5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。 

注意事项 

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用; 

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;

3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可; 

4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。

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