DiO（细胞膜绿色荧光探针） 

产品货号：CSD4007 

产品规格：10 mg 

应用范围：细胞膜荧光染料，主要用于细胞成像，细胞示踪和追踪 

产品参数 

外观：黄色固体。DiO 溶于无水乙醇、无水 DMSO 和无水 DMF，在无水 DMSO 中的溶解度约为 10 mg/mL。较难溶解 时，可以适当加热或者超声处理。 

Ex/Em (MeOH) = 484/501 nm 

CAS 号：34215-57-1 

分子式：C53H85ClN2O6 

分子量：881.7 

分子结构图： 

储存条件 

4℃避光保存，有效期见外包装。 

产品介绍 

        DiO 即 DiOC18(3)，是最常用的细胞膜荧光探针之一， 呈现绿色荧光。DiO 是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可 以侧向扩散逐渐染色整个细胞的细胞膜。DiO 在进入细胞膜 之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强， 被激发后可以发出绿色荧光，具有很高的淬灭常数和激发态 寿命，可以用标准的 FITC 滤光片检测。 

        DiO 作为示踪剂或长期示踪剂，被广泛用于正向或逆向 的，活的或固定的神经等细胞或组织。DiO 通常不会显著影 响细胞的生存力。 

        DiO 除了细胞膜荧光标记外，还可用于检测细胞的融合 和粘附，发育或移植过程中的细胞迁移，通过 FRAP（光脱 色荧光恢复技术）检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性 和标记脂蛋白等。 

        DiO 染色后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂） 的固定，但不建议在染色后进行透化的过程。此外，在固定 透化（室温下用 0.1% TritonX-100 透化）后，也可以很好地 进行质膜染色。DiO 染色强度通常低于 DiI，有时在固定组 织中会完全丧失。 

使用方法  

1. 染色液制备 

（1）配制储液：储液用无水 DMSO、无水 DMF 或 EtOH 配 制，浓度 1~5 mM。DiO 在无水 DMSO 和无水 DMF 中的溶 解度比在 EtOH 中的溶解度高。 

注：a.未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融； 

       b.发现较难溶解时可以适当加热，并用超声处理以促进 溶解。 

（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基， HBSS 或 PBS）稀释储液，配制浓度为 1~30 μM 的工作液。 最常用的工作液浓度为 5-10 μM。 

注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。 建议从推荐浓度的 10 倍范围内开始最优浓度的摸索。 

2. 悬浮细胞染色 

（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为 1×106 /mL。 

（2）37℃孵育细胞 2~20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20 min 作为起始孵育时间，之后优化体系以得到 均一的标记效果。 

（3）孵育结束，1000~1500 rpm 离心 5 min。倾倒上清液， 再次缓慢加入 37℃预热的生长培养液重悬细胞。 

（4）重复步骤（3）两次以上。 

3. 贴壁细胞染色 

（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。 

（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，但要使表 面保持湿润。 

（3）在盖玻片的一角加入 100 μL 的染料工作液，轻轻晃动 使染料均匀覆盖所有细胞。 

（4）37℃孵育细胞 2~20 min，不同的细胞最佳培养时间不 同。可以 20 min 作为起始孵育时间，之后优化体系以得到 均一的标记效果。 

（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片 2~3 次，每次用 预温的培养基覆盖所有细胞，孵育 5~10 min，然后吸干培养 基。但要使表面保持湿润。 

4. 结果检测 

样品可在培养基中进行检测，可通过荧光显微镜成像或 流式细胞仪分析。

 注意事项 

1. DiO 染色固定的细胞或组织样品时，样品宜使用配制在 PBS 中的 4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液 会导致荧光背景较高。 

2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光 淬灭。 

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Note
For research use only