15926423062  

产品展厅

JC-1线粒体膜电位检测试剂盒
物品单位 价格 品牌
560 Chemstan
  • 产地:China
  • 型号:20T
  • 货号:CSJ6004S
  • 发布日期: 2022-09-02
  • 更新日期: 2022-09-05
产品详细说明
产地 China
品牌 Chemstan
货号 CSJ6004S
用途范围 Research Grade
纯度 %
CAS编号
规格 20T
是否进口

JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒

产品货号:CSJ6004S, CSJ6004L

产品规格:20T, 100T

产品内容:

组分
CSJ6004S (20T)
CSJ6004L (100T)
A: JC-1, 100× in DMSO
100 μL
500 μL
B: 10× Assay Buffer
2 × 1 mL
10 mL
C: CCCP, 50 mM
10 μL
50 μL
储存条件

4℃避光冷藏,并尽量避免反复冻融。有效期见外包装。

光谱特性

Ex/Em:510/527 nm (单体物,绿色);

585/590 nm (聚合物,红色)


产品介绍

线粒体膜电位降低是细胞早期凋亡的一个标志,它发生 在细胞膜上的磷酯酰丝氨酸外翻与 Caspase 水解酶激活之 前。当线粒体膜通透性发生改变时,膜电位会降低。这种膜 电位的改变是由于 Bax 二聚体的形成和 Bid, Bak, Bad 的激 活,从而诱导线粒体膜形成孔隙造成的。当这些促凋亡蛋白 被激活时,线粒体同时也将细胞色素 C 释放到细胞质中。

JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电位△ Ψm 的理想 荧光探针,它可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。 在线粒体膜电位较高时,JC-1 聚集在线粒体的基质中,形 成聚合物,产生红色荧光;在线粒体膜电位较低时,JC-1 不能聚集在线粒体的基质中,此时 JC-1 为单体,可以产生 绿色荧光。通过 JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变可以很 容易地检测到膜电位的下降,同时也可以用 JC-1 从红色荧 光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。

JC-1 单体的最大激发波长为 510 nm,最大发射波长为 527 nm;JC-1 聚合物的最大激发波长为 585 nm,最大发射 波长为 590 nm。这款试剂盒操作简单快速,可以通过流式 细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪检测。

使用方法

1. 试剂准备

配制 JC-1 工作液 按如下方案配置 1 mL 1×JC-1 染色工作液:取 10 μL 100×JC-1 染色液,加入到 890 μL 灭菌的 diH2O 中,涡旋混 匀,向上述混合液中加入 100 μL 10× Assay Buffer,涡旋混 匀,即可得到 1×JC-1 染色液。

注:①配置体积可同比例扩大或缩小。

②不建议直接用 1×Assay Buffer 稀释 100×JC-1 染色液, 可能会出现沉淀。 配制 1× Assay Buffer 用 diH2O 按 10:1 稀释检测缓冲液,如 1 mL 10×assay buffer + 9 mL diH2O

2. 流式细胞染色方案

细胞染色

开始实验之前,请确保 JC-1 和 CCCP 溶液已恢复至室温。

(1)按实验所需,在培养板中接种细胞(悬浮细胞不要超过 10 6个/mL)。

(2)阳性对照组:根据培养基的量加入相应体积 50 mM 的 CCCP 溶液(如终浓度为 50 μM 即 1 mL 培养基加入 1 μL 50 mM 的 CCCP 溶液),37℃孵育 20 min。对于特定的细胞, CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相 关文献资料确定。

(3)对于贴壁细胞,染色前先进行消化处理,将其制成细 胞悬液,0.5 mL 装于离心管中。

(4)室温下 400 × g,离心 5 min。

(5)除去上清。

(6)用 0.5 mL 的 JC-1 工作液重悬细胞。

(7)置于 37℃细胞培养箱,孵育 15 min。

(8)室温下 400 × g,离心 5 min,去除上清。

(9)用 2 mL 的 PBS 缓冲液、培养基或 1× Assay Buffer 重 悬细胞,离心去除上清,重复一次。

(10)用 0.5 mL 的 PBS、培养基或 1× Assay Buffer 重悬细 胞,用流式细胞仪检测分析。 流式细胞仪定量分析 对于正常细胞,在 PE 或 PI(FL2)通道可以检测到线 粒体内的 JC-1 红色聚集物;对于凋亡细胞,在 FITC(FL1) 通道可以检测到 JC-1 绿色单体物。

3. 荧光显微镜染色方案

悬浮细胞染色

(1)参照流式细胞仪染色方案,对细胞进行染色。

(2)用 0.3 mL 的 PBS 或培养基重悬细胞。 贴壁细胞染色 (1)在培养皿或培养板上接种细胞。

(2)阳性对照组:根据培养基的量加入相应体积 50 mM 的 CCCP 溶液(如终浓度为 50 μM 即 1 mL 培养基加入 1 μL 50 mM 的 CCCP 溶液),37℃孵育 20 min。对于特定的细胞, CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相 关文献资料确定。

(3)去除培养基,加入 JC-1 工作液使其覆盖细胞表面。

(4)置于 37℃细胞培养箱,孵育 15 min。

(5)除去染液,用 PBS 缓冲液、培养基或 1× Assay Buffer 清洗一次细胞。

(6)用荧光显微镜观察分析。 荧光显微镜成像 采用可以同时检测荧光素和罗丹明,或者荧光素与 Texas Red 的双通道滤波器荧光显微镜观察细胞。对于正常 细胞,拥有完整的线粒体膜电位,线粒体在 590 nm 处发出 红色荧光,细胞质发出绿色荧光;对于凋亡或坏死的细胞, 染料以单体形式存在,在 530 nm 处发出绿色荧光。

4. 测定荧光相对比率染色方案

(1)按照实验要求在 96 孔板中接种细胞。

(2)阳性对照组:根据培养基的量加入相应体积 50 mM 的 CCCP 溶液(如终浓度为 50 μM 即 1 mL 培养基加入 1 μL 50 mM 的 CCCP 溶液),37℃孵育 20 min。对于特定的细胞, CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相 关文献资料确定。

(3)根据荧光显微镜细胞染色方案对细胞进行染色处理。

(4)用荧光酶标仪检测荧光值(红色荧光:Ex/Em=550/600 nm;绿色荧光 Ex/Em=485/535 nm)。

(5)计算红绿荧光比值。

(6)与正常细胞相比,在凋亡或坏死细胞中,红绿荧光比 值会降低。


Note
For research use only

< 返回前一个页面 >





联系方式
手机:15926423062
电话:15926423062
手机访问官网

15926423062

武汉科斯坦生物科技有限公司 版权所有(C)2022  XML 技术支持: 食品商务网   盖德化工网  

武汉科斯坦生物科技有限公司