Annexin V-PE 偶联物

产品货号：CSA6065S, CSA6065L

产品规格：0.1 mL, 1 mL

储存条件

4℃避光冷藏，请勿冻存。有效期见外包装。

光谱特性

Annexin V-PE：Ex/Em = 488/578 nm

产品介绍

        细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面 的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞 膜外，使 PS 暴露在细胞膜外表面。Annexin V具有易于结 合到磷脂类如 PS 的特性，对 PS 有高度的亲和性。因此， 该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS。 

         Annexin V-PE可以与7-AAD/PI等联合使用，来检测细胞 凋亡情况。7-AAD/PI可被排除在活细胞和早期凋亡细胞之 外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞可以同时被Annexin V-PE 和7-AAD结合染色呈现双阳性，从而来区分活细胞、早调细 胞与晚凋细胞。

使用方法

1. 根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处 理的细胞样品，作为阴性对照。此外，设定一组样品做单染， 用于调节补偿。

2. 沉淀细胞 悬浮细胞：1000 rpm，4℃离心5 min 沉淀细胞； 贴壁细胞：用不含 EDTA 的胰酶消化细胞，1000 rpm， 4℃离心5 min 沉淀细胞，胰酶消化时间不宜过长，以防引 起假阳性。对于特定的细胞，如果细胞无法完全离心至离心 管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除 上清，可以残留约50 μL 左右的培养液，以避免吸走细胞。

注：用胰蛋白酶消化然后使细胞在最佳细胞培养条件和 培养基中恢复约30 min，然后在染色。胰蛋白酶消化会暂时 破坏质膜，允许Annexin V结合磷脂酰丝氨酸在细胞膜的细 胞质表面上，从而导致假阳性染色。

3. 加入约1 mL 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细 胞，小心吸除上清。

4. 用适当的缓冲液重新悬浮细胞，调节其浓度1-5×10^6/mL （缓冲液可选择终浓度为2 mM Hepes/NaOH, pH 7.4，28 mM NaCl，0.5 mM CaCl2溶液）。

5. 取100 μL的细胞悬液于5 mL流式管中，加入5 μL Annexin V-PE混匀后于室温避光孵育5 min。

6. 加入10 μL 20 μg/mL的7-AAD或PI，并加400 μL PBS，立 刻进行流式检测。

注意事项

1. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注 意避光，以减缓荧光淬灭。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Note

For research use only