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Annexin V-PE 偶联物
物品单位 价格 品牌
389 Chemstan
  • 产地:China
  • 型号:0.1 mL
  • 货号:CSA6065S
  • 发布日期: 2022-09-02
  • 更新日期: 2022-09-06
产品详细说明
产地 China
品牌 Chemstan
货号 CSA6065S
用途范围 Research Grade
纯度 %
CAS编号
规格 0.1 mL
是否进口

Annexin V-PE 偶联物

产品货号:CSA6065S, CSA6065L

产品规格:0.1 mL, 1 mL


储存条件

4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。


光谱特性

Annexin V-PE:Ex/Em = 488/578 nm


产品介绍

        细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面 的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞 膜外,使 PS 暴露在细胞膜外表面。Annexin V具有易于结 合到磷脂类如 PS 的特性,对 PS 有高度的亲和性。因此, 该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS。 

         Annexin V-PE可以与7-AAD/PI等联合使用,来检测细胞 凋亡情况。7-AAD/PI可被排除在活细胞和早期凋亡细胞之 外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞可以同时被Annexin V-PE 和7-AAD结合染色呈现双阳性,从而来区分活细胞、早调细 胞与晚凋细胞。


使用方法

1. 根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处 理的细胞样品,作为阴性对照。此外,设定一组样品做单染, 用于调节补偿。

2. 沉淀细胞 悬浮细胞:1000 rpm,4℃离心5 min 沉淀细胞; 贴壁细胞:用不含 EDTA 的胰酶消化细胞,1000 rpm, 4℃离心5 min 沉淀细胞,胰酶消化时间不宜过长,以防引 起假阳性。对于特定的细胞,如果细胞无法完全离心至离心 管底,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除 上清,可以残留约50 μL 左右的培养液,以避免吸走细胞。

注:用胰蛋白酶消化然后使细胞在最佳细胞培养条件和 培养基中恢复约30 min,然后在染色。胰蛋白酶消化会暂时 破坏质膜,允许Annexin V结合磷脂酰丝氨酸在细胞膜的细 胞质表面上,从而导致假阳性染色。

3. 加入约1 mL 4℃预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细 胞,小心吸除上清。

4. 用适当的缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度1-5×10^6/mL (缓冲液可选择终浓度为2 mM Hepes/NaOH, pH 7.4,28 mM NaCl,0.5 mM CaCl2溶液)。

5. 取100 μL的细胞悬液于5 mL流式管中,加入5 μL Annexin V-PE混匀后于室温避光孵育5 min。

6. 加入10 μL 20 μg/mL的7-AAD或PI,并加400 μL PBS,立 刻进行流式检测。


注意事项

1. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注 意避光,以减缓荧光淬灭。

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


Note

For research use only

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