Annexin V-APC 偶联物 

产品货号：CSA6080S, CSA6080L 

产品规格：0.1 mL, 1 mL 

储存条件 

4℃避光冷藏，请勿冻存。有效期见外包装。 

光谱特性 

Annexin V-APC：Ex/Em = 650/660 nm 

产品介绍 

      细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面 的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞 膜外，使 PS 暴露在细胞膜外表面。Annexin V具有易于结 合到磷脂类如 PS 的特性，对 PS 有高度的亲和性。因此， 该蛋白可作为敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。

      Annexin V-APC可以与7-AAD/PI等联合使用，来检测细 胞凋亡情况。7-AAD/PI可被排除在活细胞和早期凋亡细胞 之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞可以同时被Annexin V-APC和7-AAD结合染色呈现双阳性，从而来区分活细胞、 早凋细胞与晚凋细胞。  

使用方法 

1. 根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处 理的细胞样品，作为阴性对照。此外，设定一组样品做单染， 用于调节补偿。

2. 沉淀细胞。 悬浮细胞：1000 rpm，离心 5 min 沉淀细胞； 贴壁细胞：用不含 EDTA 的胰酶消化细胞，1000 rpm， 离心 5 min 沉淀细胞，胰酶消化时间不宜过长，以防引起 假阳性。对于特定的细胞，如果细胞无法完全离心至离心管 底，可以适当延长离心时间或稍微增大转速。小心吸除上清， 可以残留约 50 μL 左右的培养液，以避免吸走细胞。 

注：细胞用胰蛋白酶消化后，使细胞在最佳培养条件和 最适培养基中恢复约30 min，然后再染色。因为胰蛋白酶消 化会暂时破坏质膜，允许Annexin V结合磷脂酰丝氨酸在细 胞膜的细胞质表面上，从而导致假阳性染色。 

3. 加入约1 mL 4℃预冷的 PBS，重悬细胞，再次离心沉淀 细胞，小心吸除上清。 

4. 用适当的缓冲液重新悬浮细胞，调节其浓度1-5×10 ^6/mL （缓冲液可选择终浓度为 2 mM Hepes/NaOH, pH 7.4，28 mM NaCl，0.5 mM CaCl2溶液）。 

5. 取100 μL的细胞悬液于5 mL流式管中，加入5 μL Annexin V-APC 混匀后于室温避光孵育5 min。 

6. 加入10 μL 20 μg/mL的 7-AAD 或 PI，并加400 μL PBS， 立刻进行流式检测。流式细胞仪检测时，Annexin V-APC用 633 nm激发器激发，最大发射波长660 nm，建议使用FL4或 RL1通道检测。 

注意事项 

1. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注 意避光，以减缓荧光淬灭。 

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Note

For research use only