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Annexin V-APC 偶联物
物品单位 价格 品牌
389 Chemstan
  • 产地:China
  • 型号:0.1 mL
  • 货号:CSA6080S
  • 发布日期: 2022-09-02
  • 更新日期: 2022-09-06
产品详细说明
产地 China
品牌 Chemstan
货号 CSA6080S
用途范围 Research Grade
纯度 %
CAS编号
规格 0.1 mL
是否进口

Annexin V-APC 偶联物 

产品货号:CSA6080S, CSA6080L 

产品规格:0.1 mL, 1 mL 


储存条件 

4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。 


光谱特性 

Annexin V-APC:Ex/Em = 650/660 nm 


产品介绍 

      细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面 的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞 膜外,使 PS 暴露在细胞膜外表面。Annexin V具有易于结 合到磷脂类如 PS 的特性,对 PS 有高度的亲和性。因此, 该蛋白可作为敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。

      Annexin V-APC可以与7-AAD/PI等联合使用,来检测细 胞凋亡情况。7-AAD/PI可被排除在活细胞和早期凋亡细胞 之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞可以同时被Annexin V-APC和7-AAD结合染色呈现双阳性,从而来区分活细胞、 早凋细胞与晚凋细胞。  


使用方法 

1. 根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处 理的细胞样品,作为阴性对照。此外,设定一组样品做单染, 用于调节补偿。

2. 沉淀细胞。 悬浮细胞:1000 rpm,离心 5 min 沉淀细胞; 贴壁细胞:用不含 EDTA 的胰酶消化细胞,1000 rpm, 离心 5 min 沉淀细胞,胰酶消化时间不宜过长,以防引起 假阳性。对于特定的细胞,如果细胞无法完全离心至离心管 底,可以适当延长离心时间或稍微增大转速。小心吸除上清, 可以残留约 50 μL 左右的培养液,以避免吸走细胞。 

注:细胞用胰蛋白酶消化后,使细胞在最佳培养条件和 最适培养基中恢复约30 min,然后再染色。因为胰蛋白酶消 化会暂时破坏质膜,允许Annexin V结合磷脂酰丝氨酸在细 胞膜的细胞质表面上,从而导致假阳性染色。 

3. 加入约1 mL 4℃预冷的 PBS,重悬细胞,再次离心沉淀 细胞,小心吸除上清。 

4. 用适当的缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度1-5×10 ^6/mL (缓冲液可选择终浓度为 2 mM Hepes/NaOH, pH 7.4,28 mM NaCl,0.5 mM CaCl2溶液)。 

5. 取100 μL的细胞悬液于5 mL流式管中,加入5 μL Annexin V-APC 混匀后于室温避光孵育5 min。 

6. 加入10 μL 20 μg/mL的 7-AAD 或 PI,并加400 μL PBS, 立刻进行流式检测。流式细胞仪检测时,Annexin V-APC用 633 nm激发器激发,最大发射波长660 nm,建议使用FL4或 RL1通道检测。 


注意事项 

1. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注 意避光,以减缓荧光淬灭。 

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


Note

For research use only 

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