Annexin V-PE/RedNucleus Ⅱ细胞凋亡试剂盒 

产品货号：CSA6079S, CSA6079M, CSA6079L 

产品规格：10T, 50T, 100T 

产品内容：

储存条件 

4℃避光冷藏，请勿冻存。有效期见外包装。 

Annexin V-PE 储存于 50 mM Tris, 100 mM NaCl, 1% BSA, 0.02% NaN3, pH 7.4 的溶液中。 

光谱特性 

Annexin V-PE：Ex/Em=488/578 nm 

RedNucleus II：Ex/Em=635/695 nm 

产品介绍 

       Annexin V 是一类广泛分布于真核细胞胞浆的钙离子依 赖性的磷脂结合蛋白。Annexin V 则选择性的结合磷脂酰丝 氨酸（Phosphatidylserine, PS），PS 在细胞正常状态下是分 布于细胞磷脂层内侧，即靠近细胞质，当细胞处于早期凋亡 阶段，PS 会从细胞内侧翻转至细胞外侧，此时 Annexin V 可以与 PS 结合，被红色荧光染料 PE 标记的 Annexin V 作 为探针则会在一定波长激发的情况下检测出处于早期凋亡 状态的细胞。对于坏死细胞，由于细胞完整性已经被破坏， Annexin V-PE 则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的 PS 结 合，从而也使坏死细胞呈现红色荧光。 

       本试剂盒中提供的 RedNucleus II 是一种远红光染料， 属于蒽醌类化合物，不能透过活细胞和早期凋亡细胞完整的 细胞膜，是非渗透性的，但是可以快速染色死亡和透化细胞 中的细胞核/dsDNA。RedNucleus II 是一种理想的碘化丙啶 ( PI )和 7-AAD 的替代物，与 PE 联用，无需补偿调节，具 有更好的光谱特性：不受紫外线的激发，也不与 PE/PE 同 系物重叠发射，故可以和 FITC，PE 及紫色荧光染料结合用 于多色分析。与 Annexin V-PE 联用时，RedNucleus II 被排 除在活细胞和早期凋亡细胞外，而晚期凋亡细胞和死细胞则 同时被 Annexin V-PE 和 RedNucleus II 结合染色呈现双阳 性。 

        Annexin V-PE/RedNucleus II 细胞凋亡检测试剂盒可用 流式细胞仪及或其他荧光检测设备进行检测。 

使用方法 

1. 根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处 理的细胞样品，作为阴性对照。 

2. 沉淀细胞 

悬浮细胞：1000 rpm，离心 5 min。 

贴壁细胞：用不含 EDTA 的胰酶消化后 1000 rpm，离 心 5 min。胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。对于 特定的细胞，如果细胞无法完全离心至管底，可以适当延长 离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约 50 μL 左右的培养液，以避免吸走细胞。

注：用胰蛋白酶消化然后使细胞在最佳细胞培养条件和 培养基中恢复约 30 min，然后再染色。胰蛋白酶消化会暂时 破坏质膜，允许 Annexin V 结合磷脂酰丝氨酸在细胞膜的细 胞质表面上，从而导致假阳性染色。 

3. 加入约 1 mL 4℃预冷的 PBS，重悬细胞，1000 rpm，离 心 5 min。 

4. 重复步骤 3。 

5. 用 1×Annexin V 结合缓冲液重悬细胞，调节其浓度为 1-5×10 6细胞/mL。 

6. 取 100 μL 的细胞悬液于 5 mL 流式管中，加入 5 μL Annexin V-PE、5 μL RedNucleus II，混匀后于室温避光孵育 15-20 min。 

7.（可选步骤）准备两管额外的凋亡细胞，每管中只加入一 种单染染料（Annexin V-PE 或 RedNucleus II），用于流式 单染的补偿调节）。 

8. 加入 400 μL 1× Annexin V 结合缓冲液，混匀，进行流式 检测，Annexin V-PE 由 488 nm 激光激发，检测荧光发射光 谱在 578 nm 处（FL2 或 BL2 通道），RedNucleus II 由 638 nm 激发，选择 FL4 或 RL1 通道检测。 

注意事项 

1. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注 意避光，以减缓荧光淬灭。 

2. 为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。 

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Note
For research use only