产品介绍

mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase (2'氧甲基转移酶)为重组E.coli表达的牛痘病毒DNA编码的一种甲基转移酶。该酶利用S-腺苷甲硫氨酸(S-Adenosylmethionine，SAM)为甲基供体，在RNA 5'端紧邻帽结构(Cap0)的第一个核苷酸的2'-O位点添加甲基基团，形成带有Cap1结构的mRNA。Cap1结构能够增强mRNA的翻译效率，并且降低mRNA结构本身的免疫原性，因此有助于改善mRNA转染后编码蛋白的表达水平。2'氧甲基转移酶特异性识别7-甲基鸟苷帽结构(m7GpppN，Cap0)，不会作用于5'端为pN，ppN，pppN或GpppN的RNA。

产品信息

储存条件

-20℃保存，＜0℃运输。▲避免反复冻融。

适用范围

提高mRNA转染后的翻译表达效率，并降低mRNA在体内的免疫原性。

注意事项

1. 本加帽反应效率受RNA 5'端结构影响，因此建议通过热变性(65℃加热5 min，冰上放置5 min)打开RNA 5'端的高级结构。变性条件可根据RNA 5'端结构复杂程度进行调整，若5'端无高级结构，本步骤可省略。

2. 本加帽反应一般可以在60 min内完成，若RNA 5'端结构复杂或RNA长度较短(≤ 200 nt)，可延长反应时间至120 min。

3.    SAM在pH 7 - 8，37℃条件下不稳定，需要在反应开始前新鲜配置。为避免SAM降解，该工作液需要保存于冰上。

4. 反应体系中可添加RNA酶抑制剂防止RNase污染，建议使用浓度1 - 2 U/μl。

5.   经本制品Cap1加帽的RNA可以通过Poly(A)聚合酶在3'端加上Poly(A)序列，形成完整的mRNA，用于后续转染实验或者体外翻译实验。