1)去除糖蛋白的N-连接高甘露糖。
2)仅切割高甘露糖型结构(n=2-150, x=(Man)1-2, y=H)和杂合型结构(n=2, x和/或y=AcNeu-Gal-GlcNAc)。
20mM Tris, 50mM NaCl, 5mM EDTA pH7.5, -20℃保存。
在20μl的反应体系中,37℃条件下,1小时从10μg变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需的酶量定义为一个单位。
将1×糖蛋白在糖蛋白变性缓冲液(0.5%SDS, 40mM DTT)中100℃煮沸10分钟使其变性,然后在1×反应缓冲液(50mM柠檬酸钠 pH 5.5 , 25℃)中于37℃温育,进行酶切反应。
1)酶活性不受SDS影响。
2)要使天然糖蛋白去糖基化,可尝试增加酶量,延长温育时间。