细胞简介
人角膜上皮细胞分离自眼角膜组织;角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为:上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。其主要功能如下:①角膜是 的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能，分三层细胞层，外层即是上皮细胞;②角膜上皮细胞能参与先天性免疫，能感应病原体存在并发出信号从而激活角膜防御系统;③角膜上皮细胞能高效表达醛脱氢酶。角膜上皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段，常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和药物对细胞生长的影响。

方法简介
人角膜上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10 cells/瓶。

基本信息
组织来源:眼角膜组织
包装规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
细胞形态:上皮细胞样
推荐换液:2~3次/周
生长特性:贴壁生长
推荐传代:1:2
包被条件:鼠尾胶原Ⅰ(2-5ug/cm2)
消化液:0.25%胰蛋白酶

培养保存
培养体系:人角膜上皮细胞专用培养基(TPHM104)培养条件:气相:空气，95%;CO2，5%;温度:37℃

细胞消化
1．吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次;
2．添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆
盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37°℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化;
3．用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全
培养基至5mL，置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;4．待细胞完全贴壁后，培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。

细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻瑶爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，
避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原l(2-5ug/cm2)，多聚赖氨酸PLL (0.1mg/ml) ,明胶(0.1%)，依据细胞种类而

细胞用途
仅供科研使用。

质检结果
人角膜上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

注意事项
1.收到常温细胞后，请检查产品包装状况，若发现破损、溢出及污染，请及时联系我们。
2.先不打开培养瓶盖，用75%酒精处理培养瓶表面，如果是贴壁细胞，请在培养箱中静置2-3小时（根据细胞密度状况决定）用来稳定细胞状态。
如果是悬浮细胞则不需要静置，直接按照悬浮细胞步骤操作。
3.静置完成后，在显微镜下确认细胞生长状态并拍照记录。(照片能有效帮助我们提供售后服务)
4.细胞培养过程中如有异常状况，欢迎进行技术交流。