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Stbl3
  • 品牌:Chemstan
  • 产地:China
  • 型号:100 ul
  • 货号:CS110L
  • 价格: ¥998/支
  • 发布日期: 2023-07-31
  • 更新日期: 2024-07-18
产品详请
产地 China
品牌 Chemstan
货号 CS110L
用途 Research Grade
纯度 95%
规格 100 ul
是否进口
产品规格
规格:100 μL/支
pUC19(control vector,100 pg/μL):5μL
保存条件:-80℃
有效期:6 个月
运输:干冰运输
基因型
F- mcrB mrr hsdS20(rB -,mB -) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(Str r) xyl-5λ-leu
mtl-1 endA1+
产品说明
Stbl3 感受态细胞是慢病毒载体系统推荐使用的感受态细胞。基因组含有重组酶 recA13 突变,
可有效抑制长片段末端重复区的重组,降低错误重组的概率;但不含核酸酶 endA1 突变,
体内核酸酶含量较高,提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。此菌株具有链霉素
抗性不存在 lacIqZ△M15,不可用于蓝、白斑筛选。Stbl3 感受态细胞经特殊工艺制作,
pUC19
检测转化效率 >10? cfu/μg DNA。
操作方法
一、热激转化法
1. 从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后,吸取 100 μL 感受态细胞转移到-20℃过夜预
冷的摇菌管中,加入质粒或连接产物,轻轻混匀,冰浴 30 分钟。
2. 42℃ 水浴热激 60 秒,迅速放回冰中并静置 2 分钟,该过程不要摇动摇菌管。
3. 向摇菌管中加入900 μL 37℃温浴的SOC或LB(SOC培养基可提高2-3倍转化效率),
37℃、
180 rpm、45 分钟复苏菌种。
4. 根据实验要求(质粒、重组连接产物转化),吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含
相应抗生素的 LB 琼脂培养基上,将细胞均匀涂开。将平板置于 37℃至液体被吸收,倒

置平板,37℃过夜培养。

二、10 分钟快速转化法
注:在使用卡那霉素,四环素等作为筛选抗性时,需要在 SOC 培养基中复苏以提高转化效率,当使用氨
苄青霉素作为筛选抗性时,该步骤可以省略。感受态细胞-DNA 混合物在冰上孵育 5-10 分钟后加入 4 倍
体积的 37℃ 温浴的 SOC 培养基,在 37℃ 180 rpm 孵育 1 小时,然后转移到 37℃ 预热的 LB 培养基上。
1. 提前 15 分钟将用到的筛选培养基平板拿到 37℃预热。
2. Stbl3 感受态细胞从 -80℃ 拿出,迅速插入冰中,5 分钟后待菌块融化,加入目的 DNA
(质粒或连接产物)并用手拨打 EP 管底轻轻混匀,冰中静置 5 分钟。
3. 用200 μL 枪将感受态细胞-DNA 混合物转移到已经37℃ 预热的LB培养基上,涂均匀,
表面无水渍。
4. 将平板倒置放于 37℃ 培养箱过夜培养。
? 注意事项
1. 刚刚化冻的细胞,转化效率 。
2. 避免反复化冻。
3. 避免移液枪吹吸。
4. 整个操作过程要轻柔。
5. 重组产物不建议用 10 分钟快速转化法。


二、10 分钟快速转化法
注:在使用卡那霉素,四环素等作为筛选抗性时,需要在 SOC 培养基中复苏以提高转化效率,当使用氨
苄青霉素作为筛选抗性时,该步骤可以省略。感受态细胞-DNA 混合物在冰上孵育 5-10 分钟后加入 4 倍
体积的 37℃ 温浴的 SOC 培养基,在 37℃ 180 rpm 孵育 1 小时,然后转移到 37℃ 预热的 LB 培养基上。
1. 提前 15 分钟将用到的筛选培养基平板拿到 37℃预热。
2. Stbl3 感受态细胞从 -80℃ 拿出,迅速插入冰中,5 分钟后待菌块融化,加入目的 DNA
(质粒或连接产物)并用手拨打 EP 管底轻轻混匀,冰中静置 5 分钟。
3. 用200 μL 枪将感受态细胞-DNA 混合物转移到已经37℃ 预热的LB培养基上,涂均匀,
表面无水渍。
4. 将平板倒置放于 37℃ 培养箱过夜培养。
? 注意事项
1. 刚刚化冻的细胞,转化效率 。
2. 避免反复化冻。
3. 避免移液枪吹吸。
4. 整个操作过程要轻柔。
5. 重组产物不建议用 10 分钟快速转化法。
Note
For research use only.



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