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JM109
  • 品牌:Chemstan
  • 产地:China
  • 型号:100 ul
  • 货号:CS107L
  • 价格: ¥2888/支
  • 发布日期: 2023-07-31
  • 更新日期: 2024-06-17
产品详请
产地 China
品牌 Chemstan
货号 CS107L
用途 Research Grade
纯度 95%
规格 100 ul
是否进口
产品规格
规格:100 μL/支
pUC19(control vector,100 pg/μL):5μL
保存条件:-80℃
有效期:6 个月
运输:干冰运输
基因型
endA1 recA1 gyrA96 thi-1 relA1 supE44 hsdR17(rk -,mk+ ) △(lac-proAB)/F' [traD36 proAB+ laqI q
lacZ△M15]
产品说明
JM109 感受态细胞 recA1 和 endA1 的突变有利于克隆 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提
取。携带 hsdR17 基因型背景,使得异源 DNA 不被内源核酸酶系统降解。lacZ△M15 的存
在使 JM109 可用于构建克隆,蓝白斑筛选实验。JM109 感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19
质粒检测转化效率可达 10 8 cfu/μg DNA。
操作方法
一、热激转化法
1. 从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后,吸取 100 μL 感受态细胞转移到-20℃过夜预
冷的摇菌管中,加入质粒或连接产物,轻轻混匀,冰浴 30 分钟。
2. 42℃ 水浴热激 60 秒,迅速放回冰中并静置 2 分钟,该过程不要摇动摇菌管。
3. 向摇菌管中加入900 μL 37℃温浴的SOC或LB(SOC培养基可提高2-3倍转化效率),
37℃、
180 rpm、45 分钟复苏菌种。
4. 根据实验要求(质粒、重组连接产物转化),吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含
相应抗生素的 LB 培养基上,将细胞均匀涂开。将平板置于 37℃至液体被吸收,倒

置平板,37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放 37℃培养至少 15 小时。


二、10 分钟快速转化法
1. 提前 15 分钟将用到的筛选培养基平板拿到 37℃预热。
2. JM109 感受态细胞从 -80℃ 拿出,迅速插入冰中,5 分钟后待菌块融化,加入目的 DNA
(质粒或连接产物)并用手拨打 EP 管底轻轻混匀,冰中静置 5 分钟。
3. 用200 μL 枪将感受态细胞-DNA 混合物转移到已经37℃ 预热的LB培养基上,涂均匀,
表面无水渍。
4. 将平板倒置放于 37℃ 培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放 37℃培养
至少 15 小时。
? 注意事项
1. 刚刚化冻的细胞,转化效率 。
2. 避免反复化冻。
3. 避免移液枪吹吸。
4. 整个操作过程要轻柔。
5. 重组产物不建议用 10 分钟快速转化法。
Note
For research use only.



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