前言
抗性淀粉（RS）是指在人小肠内不能被酶解的淀粉，在大肠部分或完全发酵。RS 是总膳食纤维的组分之一。

抗性淀粉的测定方法： 样品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶（AMG）37℃振荡水浴孵育 16 小时，在这期间，通过两种酶的联合作用，非抗性淀粉被溶解，水解成 D-葡萄糖，孵育结束后，加入等体积的乙醇或工业甲基化酒精（IMS,变性乙醇）终止反应。离心上述溶液，收集上清勿弃，底部残留絮状团即为样品中的 RS，用含水的 IMS 或乙醇（50%v/v）洗涤絮状团，洗涤后离心，再重复一次洗涤离心，收集离心后获得的上清，与之前收集的上清混合。小心倒出试管残留的液体，将絮状团置于冰水浴中，加入 2M KOH 溶解，溶解的同时用磁力搅拌机剧烈搅拌。用醋酸盐缓冲液将这个溶液调至中性，用 AMG 将淀粉定量水解成葡萄糖。D-葡萄糖用葡糖氧化酶/过氧化物酶试剂（GOPOD）测定，这也是对样品中 RS 含量的测定。非抗性淀粉（可溶性淀粉）的测定可通过集中的上清液并定容至 100mL，再用 GOPOD 测定 D-葡萄糖完成。

应用性和 性
这个方法需要样品中 RS 含量多于 2% w/w，如 RS 含量多于 2% w/w，常规标准误差为±5%，少于 2% w/w RS的误差更高。

溶液/悬浮液的制备

使用瓶子 1 中提供的的产品（试剂一），这个溶液是有粘性的，因此应使用移液器移取分装。（4℃下稳定
性> 3 年）稀释后试剂一：取 2 mL 瓶子 1 中溶液用 100m pH6.0 顺丁烯二酸钠缓冲液稀释至 22mL。（注：以
5 mL 为单位分装后用聚乙烯管冷冻保存，反复冻融不会影响稳定性，稳定性-20℃ >5 年）
没有提供的试剂（应购买分析纯级）
1.顺丁烯二酸钠（马来酸钠）缓冲液(100mM，pH6.0)加上 2mM 二水氯化钙和叠氮化钠（0.02%w/v）：用 1600mL
蒸馏水溶解 23.2g 顺丁烯二酸，用 4M（160g/L）氢氧化钠调节 pH 至 6.0，加入 0.6g 二水氯化钙和 0.4g 叠氮化
钠，混合并溶解，定容至 2L。（4℃下可保存一年）
2.醋酸钠缓冲液（1.2M，PH3.8）：将 69.6mL 的冰醋酸（1.05g/mL）加至 800 mL 的蒸馏水中，用 4M 氢氧化钠
调节 pH 至 pH3.8，用蒸馏水定容至 1L。（室温下可保存一年）
3.醋酸钠缓冲液（100mM，PH4.5）：将 5.8mL 的冰醋酸加至 900 mL 的蒸馏水中，用 4M 氢氧化钠调节 pH 至
4.5，用蒸馏水定容至 1L。（4℃保存 2 个月）
4.氢氧化钾溶液（2M）：将 112.2gKOH 加至 900 mL 的去离子水中，搅拌溶解。定容至 1L，密封保存。（室
温下可保存 2 年）
5.含水乙醇（或者 IMS）（大约 50%v/v）：将 500mL 乙醇（95%v/v 或者 99%v/v）或者工业甲基化酒精（IMS；
变性乙醇；95% v/v 乙醇加上 5%甲醇）至 500mL 的水中，密封保存。（室温下稳定保存>2 年）
Note
For research use only .